類型: 斑馬魚研究設備
名稱:斑馬魚胞內單細胞測量系統
CellFish intracellular single heart cell measuring system
型號:ZFS-03
MDE 公司通過標準的微電極技術,多年來已成功的設計開發了自己獨特的工作站。更深入的開發了針對胚胎(the embryonic)和成年斑馬魚心臟(adult zebrafish heart)離子通道( ion channels)電壓響應(AP)的測量-----CellFish system。
標準微電極方法優勢(The advantage of the standard microelectrode method)
近幾十年來研究證明,斑馬魚是心臟研究的首選研究課題,尤其是心臟生理和藥理試驗,斑馬魚心臟電生理學顯示了許多相似點,目前使用的哺乳動物實驗模型,例如:離子通道(ion channels)、心電圖(ECG)等,它有一個獨特的生理發展適應性?;谙嗨菩缘陌l現,應用在哺乳動物的細胞(cellular)技術(標準微電極(standard microelectrode)、膜片鉗(patch clamp))也用于對斑馬魚的研究了。
Atrial and ventricular cardiac action potentials
成年斑馬魚the adult zebrafish (A),人類human(B)和小鼠mouse (C)心房和心室心臟動作電位
圖中分別是成年斑馬魚the adult zebrafish (A),人類human(B)和小鼠mouse (C)的心房(左列)和心室(右列)心臟動作電位的代表性圖形,斑馬魚自發的搏動的心臟APs記錄是在28°下測量的,而人類和小鼠心臟組織是在37°C下通過1赫茲的頻率刺激測定的,斑馬魚的記錄是從心室的心尖一半和從心房的中心區域獲得。
標準微電極技術的優點是,橫跨膜的變化記錄從制備電極刺穿到放大器,在一個細胞的準備、電極的尖端檢測細胞內空間與細胞外空間的電勢變化。這種技術確保了細胞內外空間之間的電壓變化,由此可對所引起的給定區域的所有活躍的離子通道進行測量,測量方法獲得的ECG信號,定義了心電圖(ECG)的曲線形成,該心臟生理檢查方法的曲線形成已在臨床實踐中廣泛使用。
系統組成
1. 機械單元(Mechanical unit);
2. 測量系統(Measuring system):
① 高輸入阻抗(High input impedance)、低噪聲放大器 low noise amplifier );
② 數據顯示、存儲和分析硬件/軟件(EASY-CEL);
它的底部是一個高度穩定,無振動平臺,從而保持了成魚 (adult)和胚胎標本(embryonic specimen)的制備,各組件功能:
Mechanical unit(機械裝置) Flowchart the mechanical unit(機械裝置流程圖)
1) 成魚心臟解剖器官浴模式(The organbath modes for adult fish heart dissection)
開循環(Open circuit)
生理溶液在器官浴里不斷流動和保持合適的液體水位便于泵抽吸。
閉循環(Closed circuit)
流動的生理溶液中止:龍頭1閉合,龍頭3打開時泵就停止,該溶液就可以添加到器官里。
2) 試驗裝置(The setup of equipment necessary for the experiment)
系統設計優點之一是所必需的試驗設備(pl:操縱器(manipulators)、器官?。?/span>organ bath)、燈光( lighting)、等等)被安裝在工作臺最佳位置,另一個優點是試驗人員可以靈活的改變工作臺上的器官浴位置,以適應任何的物種,設定穿刺由器官浴的縱向可調支承的位置。該解決方案允許多個胚胎的同時測量。
The mechanical design of the system
Embryo in the bath 浴槽里胚胎 The organ bath 器官浴槽
存儲模式(Store mode)
提供有主曲線顯示,某一個特定時刻的存儲、在測量過程中的任何時間、并比較該曲線與在該時刻測量或監測的曲線。此外,還有一種可能性,以計算平均距離的曲線。
Store mode Average mode
刺激隔離器(Internal stimulator with isolated power output stage)
Parameter ranges:參數范圍:
1. 脈沖周期Pulse Period (PP)500μs...999 s
2. 延遲Delay (DE)0.1μs...999 s
3. 脈沖寬度Impulse Width (PW)10μs.. .999 s
4. 訓練延遲Train Delay (TD)10 μs...999 s
5. 訓練編號Train Number (TN) 1 ... 999
刺激隔離器性能規格:
1. 最大輸出電壓Max. output voltage ± 10 V, ± 100 V
2. 電流限制Current limit ± 10 mA, ± 100 mA
Stimulator settings Stimulator module
刺激隔離器(Internal stimulator with isolated power output stage)
Parameter ranges:參數范圍:
1. 脈沖周期Pulse Period (PP)500μs...999 s
2. 延遲Delay (DE)0.1μs...999 s
3. 脈沖寬度Impulse Width (PW)10μs.. .999 s
4. 訓練延遲Train Delay (TD)10 μs...999 s
5. 訓練編號Train Number (TN) 1 ... 999
刺激隔離器性能規格:
1. 最大輸出電壓Max. output voltage ± 10 V, ± 100 V
2. 電流限制Current limit ± 10 mA, ± 100 mA
心臟單細胞(Heart single-cell registration)
對于與標準的微電極技術測量心臟的AP曲線,在聯機模式中的以下參數被顯示,分析和存儲,在測量過程中。在后期的脫機模式下的AP曲線和保存的參數可被重新分析和修飾:
1. RP – rest potential
2. TOP – taking off potential
3. APA1 – AP to the RP = OS – RP
4. APA2 – AP to the MDP =OS – MDP
5. MDP – minimum potential
6. OS – overshot
7. APD10 –10% coming back
8. APD25 –25% coming back
9. APD50 –50% coming back
10. APD75 –75% coming back
11. APD90 - 90% coming back
12. APD50mV –50mV coming back
13. CT – leading time
14. dVmax – the fastest point of the rising branch of the sign
15. dVmin – the fastest point of the descending branch of the signal
系統配置:
完整的工作站(Complete Workstation): 包含放大器,硬件接口,軟件,刺激隔離器和電腦。
preamplifier Stimulator module Cetral workstation
刺激隔離器
Converter preamplifier Easy CELL software module
附件(Additional devices) :
法拉第籠KFA Faraday cage 球形操縱器帶刺激電極 精密操縱器 (1μm/pace X,Y plane)
測量系統(The measuring system)
為了實現這些有利的參數,線性放大器被選為參考接地,所有的這些服務功能由放大器提供(例如:容量補償(capacity compensation)、電阻測量(resistance measurement),直流電極接觸電勢取消(DC electrode contact potential cancellation )等)都可以通過不斷的電阻(1?)參考接地。
包含組件:
1. 高輸入阻抗(high input impedance(1012?),
低噪音(low noise),低容量(low capacity(25pF) 放大器,
2. 隔離刺激器(isolated stimulator end stage 10V/10mA),
3. INTRASYS測量、分析和數據存儲軟硬件系統與刺激器模塊。
為了避免外部噪聲污染(由于該系統不包含任何過濾器),并保持容量低,與力學共同的屏蔽接地點已被設計好。通過這一點,我們可連接到法拉第籠的屏蔽接地(GND)。
測量系統(The measuring system)
1) 放大器(amplifier)
該放大器是為標準的微電極技術開發的,應用技術解決方案允許使用10MΩ和100MΩ之間的玻璃電極的AP信號精確傳輸。放大器包含兩部分:一個是““INTE”高輸入阻抗前置放大器,它可以直接連接到電極套管(例如:WPI, Harvard, Clark, etc.);另一元件是功率放大器,其中包含先前描述的電路元件,并且提供了連接到數據成像,存儲和分析用硬件-軟件系統(EASY-CEL)。
preamplifier amplifier
2) EASY-CEL 軟硬件
EASY-CEL是一個單通道存儲示波器軟件,該軟件可被用于顯示,存儲和分析細胞內外電位,引發在心臟或任何其他解剖區域(例如:腦(brain)、骨髓( bone marrow)等)的體內( in-vivo)或體外(in-vitro)的方法。
單細胞活動(One-cell activity) 皮層誘發電位(Cortical evoked potentials)
心臟單細胞(Heart one cell) 細胞內單個神經細胞(Intracellular one neuronal cell)
心臟單細胞(Heart single-cell registration)
對于與標準的微電極技術測量心臟的AP曲線,在聯機模式中的以下參數被顯示,分析和存儲,在測量過程中。在后期的脫機模式下的AP曲線和保存的參數可被重新分析和修飾:
1. RP – rest potential
2. TOP – taking off potential
3. APA1 – AP to the RP = OS – RP
4. APA2 – AP to the MDP =OS – MDP
5. MDP – minimum potential
6. OS – overshot
7. APD10 –10% coming back
8. APD25 –25% coming back
9. APD50 –50% coming back
10. APD75 –75% coming back
11. APD90 - 90% coming back
12. APD50mV –50mV coming back
13. CT – leading time
14. dVmax – the fastest point of the rising branch of the sign
15. dVmin – the fastest point of the descending branch of the signal
Software surface Analyzed parameters